Book/Report

FZJ-2019-00348

http://join2-wiki.gsi.de/foswiki/pub/Main/Artwork/join2_logo100x88.png Die Acetohydroxysäuresynthase von Corynebacterium glutamicum : molekulare Analyse des ilvBNC- Operons und Modell zur Regulation der Genexpression

Keilhauer, C. (Corresponding author)FZJ*

1995
Forschungszentrum Jülich GmbH Zentralbibliothek, Verlag Jülich

Please use a persistent id in citations: http://hdl.handle.net/2128/21207

Report No.: Juel-3016

Abstract: Die multivalent regulierte Acetohydroxysäuresynthase leitet die parallelen Reaktionen der Synthese von L-Isoleucin, L-Valin und L-Leucin, sowie auch der Coenzym A-Vorstufe Pantothensäure ein. Ziel dieser Arbeit war es, die Gene der Acetohydroxysäuresynthase und der mit ihr geclustert vorliegenden Isomeroreduktase aus $\textit{Corynebacterium glutamicum}$ zu charakterisieren und die Genexpression zu untersuchen. $\bullet$ Die Sequerzierung eines 4705 bp umfassenden DNA-Fragments ergab, daß die Acetohydroxysäuresynthase durch $\textit{ilvB}$ (625 AS) und $\textit{ilvN}$ (172 AS) kodiert ist. Das Isomeroreduktase-Gen $\textit{ilvC}$ kodiert für ein Polypeptid mit 337 Aminosäuren. Homologievergleiche der bekannten $\textit{IlvC}$-Polypeptide erlaubten deren Einteilung in drei verschiedene Strukturklassen und die wahrscheinliche Lokalisation funktioneller Domänen. Es konnte gezeigt werden, dali entgegen der Situation in Enterobakterien nur eine einzige Acetohydroxysäuresynthase in $\textit{C. glutamicum}$ vorliegt. $\bullet$ Es werden drei verschiedene Transkripte des $\textit{iIvBNC}$-Operons gebildet : ein $\textit{ilvBNC}$-Transkript (3,9 kb), ein $\textit{ilvNC}$-Transkript (2,3 kb) und ein $\textit{ilvC}$-Transkript (1,1 kb).Jedes der Transkripte wird an einem eigenen Promoter initiiert. Die Termination der Transkription erfolgt für alle drei $\textit{ilv}$-Transkripte gemeinsam an einem rho-unabhängigen Terminator hinter $\textit{ilvC}$. Die durch $\alpha$-Ketobutyrat bewirkte hohe Acetohydroxysäuresynthase-Aktivität beruht auf einer gesteigerten Transkription des $\textit{iIvBNC}$-Operons. $\bullet$ Durch Primer Extension-Analysen bzw. die aminoterminale Ansequenzierung eines Fusionsproteins wurde eindeutig der Transkriptions- und Translationsstart von $\textit{ilvB}$ identifiziert und somit der für die Regulation der Genexpression relevante Bereich eingegrenzt. $\bullet$ Es konnte nachgewiesen werden, daß innerhalb dieses Bereichs ein kurzes Leittranskript von etwa 200 bp gebildet wird. Ferner läßt sich eine RNA-Sekundärstruktur alternativ zu einem rho-unabhängigen Terminator bzw. einem Antiterminator auffalten. Dies weist auf eine Expressionskontrolle des $\textit{ilvBNC}$-Operons durch Attenuation bin, die allerdings nur wenige Gemeinsamkeiten mit der Attenuation aus Enterobakterien besitzt.

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Contributing Institute(s):

1. Publikationen vor 2000 (PRE-2000)

Research Program(s):

1. 899 - ohne Topic (POF3-899) (POF3-899)

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Database coverage:

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